分享一篇发表在ACS Chem. Biol.上的文章，题目为“Modulation of Core-Fucosylation Oxidation for Selective Enrichment and Characterization of Cell Surface Glycoprotein”，通讯作者是来自大连理工大学的董铭铭教授，她的研究方向聚焦于翻译后修饰蛋白质组学新方法开发等。这篇文章中，作者研究了核心岩藻糖基化氧化的机制，并开发了选择性富集核心岩藻糖基化的方法。

蛋白质核心岩藻糖基化在多种生物过程中发挥关键作用。然而由于核心岩藻糖基化的丰度低和糖链结构复杂性，其选择性富集和深度分析面临挑战。因此作者结合此前开发的糖链截断和化学氧化两种策略，实现核心岩藻糖基化的分离和表征。

作者首先使用核心岩藻糖基化肽段测试了不同条件下核心岩藻糖基化的化学氧化产物，确定5至10 mM高碘酸钠在25 ℃下1至2 h具有类似的氧化产物，可用于后续实验。

接着，作者对糖链截断和化学氧化的联用流程进行了优化。作者使用IgG中分离的完整N-糖肽测试两种处理流程，分别是“先氧化后切割”和“先切割后氧化。通过LC-MS/MS对产物进行定量分析，结果显示“先氧化后切割”策略能够产生更高强度的糖肽信号。

在对流程进行优化后，作者将这一策略应用于活细胞表面的核心岩藻糖基化分析。使用高碘酸钠处理活细胞，将细胞表面糖链中的邻二醇结构氧化生成醛基，随后提取蛋白质并消化为肽段，再进行糖链切割，最后使用肼树脂捕获糖肽中的醛基，并用甲氧胺释放糖肽。基于这一策略，作者鉴定到74个核心岩藻糖基化修饰肽段。

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总的来说，这篇文章结合化学氧化和糖链截断两种策略，实现了对细胞表面核心岩藻糖基化的选择性富集和表征。

本文作者：LCX

责任编辑：LZ

DOI：10.1021/acschembio.5c00762

原文链接：https://doi.org/10.1021/acschembio.5c00762