分享一篇发表在Angew. Chem. Int. Ed.上的文章，题目为“A Label-Free Phosphate-Transfer DNAzyme for the Cost-Effective Point-of-Care Detection of Influenza Virus”，通讯作者是武汉大学的王富安教授，研究方向包括生物传感分析等。
流感病毒是引发季节性呼吸道感染的主要病原体之一，严重威胁全球公共卫生安全。传统的流感病毒检测方法包括抗体检测和RT-qPCR等，前者需要开发抗体，后者需要专业的仪器和人员。因此，开发一种操作简便、成本低廉且适用于现场检测（Point-of-Care Testing，POCT）的技术具有重要意义。
DNAzyme是具有催化活性的单链DNA分子，在POCT领域显示出巨大潜力。然而，传统的DNAzyme检测系统通常需要对底物进行荧光标记或猝灭基团修饰；常用的无标记DNAzyme，如Hemin/G-quadruplex系统可以模拟HRP的催化功能，但需要加入血红素、过氧化氢等底物，操作较为繁琐。本文希望发展一种无需对底物进行化学改造、操作简便、成本低廉且稳定性高的DNAzyme检测平台，用于流感病毒RNA的快速、灵敏检测。
作者选用了一种具有磷酸转移活性的DNAzyme（P-Dz），并通过系统筛选发现了一种商业化的小分子探针DiFMUP可以在P-Dz的催化下高效脱磷酸，生成具有强荧光的产物DiFMU，其荧光量子产率高，光稳定性好，可以作为信号输出分子。
随后，作者对P-Dz的催化条件进行了系统优化，且为了提高检测的特异性并降低背景信号，将P-Dz拆分为两个无催化活性的亚基，分别与针对目标病毒的RNA识别序列连接。当RNA存在时，两个探针杂交与RNA结合，促使P-Dz在空间上靠近并恢复催化活性。作者通过实验验证了这一设计的可行性，并证明这一系统可以实现纳摩尔级别的检出限，且可通过使用不同的DNA探针实现对不同病毒的特异性识别。
为了实现现场可视化检测，作者引入测试滤纸条（Test filter strip，TFS）作为反应载体，加入样本进行反应后，将TFS置于365 nm紫外激发下，通过智能手机拍摄荧光图像，利用专业APP提取RGB中的蓝色通道值并进行定量分析。作者也在唾液样本中进行了测试，表明该系统具有临床应用的潜力。
总之，本文发展了一种基于磷酸转移酶活性的DNAzyme的无标记POCT平台，可实现对流感病毒的高灵敏和高特异性检测。
本文作者：YAQ
责任编辑：LYC
DOI：10.1002/anie.202516920
原文链接：https://doi.org/10.1002/anie.202516920
