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选乙腈还是甲醇?——HPLC分析试剂选择2017-07-19

有时单用乙腈或甲醇可能会达不到理想的分离效果,在流动相同时使用乙腈和甲醇可改变选择性以获得较好的分离效果。

基于溶剂不同的选择性,甲醇为类质子溶剂,可形成氢键,对于分离酸碱或电负性强的化合物可提高选择性,乙腈为极性分子,其碳氮三键含有未成键电子,能与含有空轨道的化合物结合,则与甲醇有着不同的化合物选择性。

通常乙腈或甲醇有以下差别:
1.吸光度乙腈HPLC级吸光度值低。

乙腈和甲醇的市销HPLC级和优级的吸收光谱中,乙腈HPLC吸收最小(特别是在短波长上小)。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质,在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV检测时,产生的噪声小,因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外,在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少,虽然,其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样,但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。另外,甲醇的HPLC级和优级,虽然所得的光谱相差不大,但是优级不能保证吸光度,有可能产生偏差,价格也相差不大,所以尽量使用HPLC级。

2.压力

根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异,水/乙腈,水/甲醇混合液的比例与输液压力的关系中,甲醇与水混合,压力增高,而乙腈同样与水混合压力较低。所以,乙腈在同样的流速下不在柱内增加多余的压力。

3.流动相的脱气

在流动相瓶内进行溶剂混合时(等浓度系统),甲醇与水混合时发热,多余的溶解空气较易变为脱出气泡(脱气容易);而乙腈由于吸热冷却,随着慢慢回到室温,产生气泡,所以要考虑脱气(加温搅拌,过滤膜,He脱气)等。

4.分离(洗脱)的选择性

乙腈和甲醇在分离的选择性上不同。由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性,乙腈和四氢呋喃是非质子性)不同所致。因此,在用乙腈类不能获得分离的选择性,就试用甲醇类看看。

5.峰形

像水杨酸化合物(在邻位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈时拖尾严重,用甲醇可抑制。
另外,聚合物反相柱比硅胶柱,更具有峰形宽的倾向,特别是用聚苯乙烯分析柱检测芳香族化合物时常见。这在流动相使用甲醇时非常明显,而用乙腈时不明显。为此,用聚合物反相柱时建议采用乙腈。

6.洗脱能力
乙腈和甲醇分别用同样的比例与水混合时,一般情况下,乙腈的洗脱能力强。特别是混合比例低时,从咖啡因和苯酚的洗脱来看,获得同样的保留时间,乙腈的比例,只需甲醇的比例的一半以下即可。另一方面,有机溶剂100%或与此极接近时,从胡萝卜素和胆甾醇来看,常常都是甲醇的洗脱能力强。混合比在50比1等较为特殊时,调制的误差大,影响保留时间,或平衡化的时间长,乙腈遇到这种情况时,用甲醇的10比1混合代替乙腈,操作方便些。溶剂受温度影响时,不采用容器定量,而采用重量的方法(考虑比重),可使混合比的误差减小。

    
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