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Anal. Chem. | 通过可逆噻唑烷化学对HNE修饰进行深入分析2024-04-04

分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章:In-Depth Profiling of 4-Hydroxy-2-nonenal Modification via Reversible Thiazolidine Chemistry,通讯作者是复旦大学化学系的陆豪杰和中山医院肝癌研究所的张莹,他们的研究方向包括蛋白质组学和糖组学。在这篇文章中,作者开发了一种半胱氨酸化学探针用于HNE修饰的捕获。

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4-羟基-2-壬烯醛(HNE)是一种氧化应激下由脂质过氧化产生的脂质衍生亲电试剂(LDE),可以通过Michael加成在蛋白质的Cys、His和Lys等残基上形成翻译后修饰。此前已经开发出多种分析HNE修饰的方法,包括使用HNE的生物正交类似物富集HNE修饰,或通过羟胺和酰肼等反应基团直接捕获HNE修饰。
此前的研究报道过,β-氨基硫醇可以与醛基反应生成噻唑烷,并且可以在氯化烯丙基钯二聚物处理下快速分解。基于这种可逆的反应性,作者设计了一种脱硫生物素-半胱氨酸探针,捕获蛋白质组中的HNE修饰,富集后通过钯催化裂解,释放修饰肽进行LC-MS/MS分析。
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作者首先优化了捕获、富集和切割步骤的反应条件。利用HNE模型肽及其与BSA胰蛋白酶消化物的混合进行评估,可以观察到该方法具有很好的富集效果和选择性。
然后作者在HNE处理的Hela和293T细胞中对HNE修饰进行了鉴定,在蛋白的修饰位点数、修饰肽的残基分布、修饰肽的物理化学性质和修饰蛋白的功能等方面进行了分析。
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最后,作者采用了SILAC-ABPP策略,通过高低浓度的HNE处理293T细胞,实现了对细胞中HNE修饰敏感位点的定量分析。
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总的来说,这篇文章利用可以与醛基反应生成噻唑烷,并在钯催化下裂解的化学探针,实现了对HNE修饰的组学分析。
本文作者:LCX
责任编辑:LYC
原文链接:https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.3c05060
文章引用:10.1021/acs.analchem.3c05060
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