近日,中国科学院天津工业生物技术研究所朱蕾蕾研究员团队发展了一种新型的基于荧光检测的高通量筛选方法对IsPETase进行定向进化,获得的突变体DepoPETase在中温度下展示出优异的废弃PET解聚性能并对多种废弃PET包装实现了完全解聚。
首先,作者设计并合成了一种PET水解酶的新型模型底物,BHET-OH(PET寡聚物BHET的衍生物),利用其被PETase水解后能产生荧光物质TPA-OH的特性,建立了基于荧光检测的PETase水解活性微孔板筛选方法,该荧光方法也适用于其他PET水解酶。随后基于该荧光高通量筛选方法对PETase进行多轮定向进化和位点组合,获得的最佳突变体DepoPETase的Tm值提高了23.3°C,50°C反应48 h后,对无定型PET膜的水解活力是野生型的1407倍。



Lixia Shi, Dr. Pi Liu, Zijian Tan, Wei Zhao, Junfei Gao, Prof. Dr. Qun Gu, Prof. Dr. Hongwu Ma, Prof. Dr. Haifeng Liu, Prof. Dr. Leilei Zhu
中国科学院天津工业生物技术研究所博士生石利霞和副研究员刘岯为该论文共同第一作者,朱蕾蕾研究员与南京中医药大学刘海峰教授为该论文共同通讯作者。
Angewandte Chemie International Edition
DOI: 10.1002/anie.202218390







