N-连接的糖基化在许多用于治疗的蛋白质中起着关键作用。人源N-连接聚糖在细菌中糖基工程化的一个限制是难以在单一步骤中将单个N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）通过N-乙酰葡糖胺化安装到天冬酰胺上。

有鉴于此，Stanford University的Michael C. Jewett课题组开发了一种使用Campylobacter jejuni来源的低聚糖基转移酶PglB对蛋白质进行N-乙酰葡糖胺化的体外方法。

图片来源：ACS Chem. Biol.

首先，使用无细胞蛋白质合成（CFPS）来测试先前在文献中报道的混杂的PglB突变体产生N-GlcNAc的能力，并成功地确定具有N311V突变的PglB（PglB^N311V）相对于野生型酶表现出增加的GlcNAc-转移酶活性。

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然后，通过生产富含PglB^N311V的CFPS提取物来提高转移效率，并进一步优化反应条件，实现98.6±0.5%的糖基化效率。这种方法将扩大用于治疗研究和生物制造的糖工程工具箱。

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原文标题: Establishing a Cell-Free Glycoprotein Synthesis System for Enzymatic N‑GlcNAcylation

原文作者：Madison A. DeWinter,¶ Derek A. Wong,¶ Regina Fernandez, Weston Kightlinger, Ariel Helms Thames, Matthew P. DeLisa, and Michael C. Jewett*

https://doi.org/10.1021/acschembio.4c00228