分享一篇发表在Angew. Chem. Int. Ed.上的文章，题目为 “Simple and Rapid Tumor EV Enrichment Enabled by Long DNA Probe-Guided Entanglement”，通讯作者是来自重庆医科大学的李欣宇医生，丁世家教授，其中丁教授的研究方向是分子诊断与生物分析化学。
细胞外囊泡（EVs）的特定亚群在生物标志物发现、疾病诊断和治疗药物方面具有重要的临床潜力。传统的细胞外囊泡分离方法包括超速离心（UC）和多步超滤（UF）,需要大量人力和时间成本，本文开发了一种快速简单的细胞外囊泡富集方法。
作者开发的策略称为长DNA探针引导的EV纠缠（LODGE）。具体是使用两个长DNA探针，探针上具有用于靶蛋白识别的DNA适配体，还有间隔序列，用于夹板链识别的序列以及部分用于形成sG4陷阱的序列。长DNA探针通过适配体与肿瘤来源的EV上的蛋白结合后，与夹板链进行杂交，缠结，最终可以在10000g，10min离心下被分离出来。
作者首先验证了该策略，作者使用LpPDL1和LpEpCAM成功实现了晚期肺癌患者的血浆样本中富含PDL1和EpCAM的肿瘤EV的富集，并证明了LODGE方法的污染物清楚率与金标准UC相当，高于IP和UF。
然后作者考察了LODGE策略的应用场景。首先在蛋白质组鉴定方面，LODGE策略鉴定的蛋白与UC数量相当，但火山图中可以看出肿瘤蛋白的明显富集。然后作者证明了LODGE策略分离的肿瘤EV在DNase1处理后保留较高的生理活性，其H1975细胞摄取率高于UC，且细胞划痕后愈合率也显著高于UC和contro组。
最后作者发展了LODGE-ThT方法用于分离和检测肿瘤EV，具体来说就是集成LODGE和G4/ThT荧光系统。作者验证了该方法的可行性后将该方法用于非小细胞肺癌（NSCLC）的准确诊断中，LODGE-ThT方法可以准确诊断NSCLC和良性肺结节以及健康患者。最后作者还通过对tEV亚群和临床指标的机器学习用于癌症类型分类。
总的来说，本研究建立了一种新颖、通用的LODGE方法，能够简单、快速、特异地从复杂的生物培养基中分离tEV亚群。
本文作者：YDP
责任编辑：WYQ
DOI：10.1002/anie.202501804
原文链接：https://doi.org/10.1002/anie.202501804
