Angew. Chem. ：活细胞microRNA原位多重成像及定量矫正

精确测量单个活细胞中多个microRNA的拷贝数和空间分布是了解细胞行为和功能的必要条件。由于受激光共聚焦荧光显微镜的光谱重叠的限制和缺乏和对活细胞毒性小的高通量方法，单个活细胞中多个microRNA的同时成像分析仍是一个难题，此外，由于活细胞中三维液体环境复杂度高，检测干扰性高，精细胞内定量的准确性受时空影响大。

深圳大学生物医学工程学院的董海峰教授领导的团队开发了一种具有错误矫正的荧光标记编码方法，称为荧光编码纠错标记（fluorophores-encoded error-corrected labels，FluELs）。FluELs由细胞安全性高的壳核纳米二氧化硅材料作为骨架，中心包埋不同比例的编码双荧光团(Cy5和Cy3)用于识别microRNA类别，利用恒定数量的AMCA荧光用于矫正活细胞中折射波动造成的定量偏差，外壳负载了分子信标探针，用于特异性检测microRNA。可以准确定量和原位解析乳腺癌细胞9种microRNA，并评估它们再活细胞内定量水平和分析单细胞异质性。

FluELs主要采用易于控制条件的水热法合成壳核纳米二氧化硅载体结构，采用酰胺反应稳定负载染料和探针，FluELs具有高负载量、高荧光稳定性和低细胞毒性的特点。

同时，由于活细胞中三维液体环境复杂度高，胞质流动性强，折射干扰性高，精细胞内定量的准确性受时空影响大。FluELs提供了一个实时原位的AMCA内参矫正元件，用于修正由于液体流动和纵向扫描深度造成的信号偏差，使检测精度提高了2.53倍。

FluELs提供了一个单细胞分析平台来评估microRNA表达谱和microRNA相关疾病的分子机制，可以对单个活细胞中多个目标物分子进行同时准确检测，具有广泛的生物医学应用价值。

论文信息

Spatially Resolved, Error-Robust Multiplexed MicroRNA Profiling in Single Living Cells

Wei Wei, Dr. Wenhao Dai, Dr. Fan Yang, Dr. Huiting Lu, Dr. Kai Zhang, Yi Xing, Dr. Xiangdan Meng, Dr. Liping Zhou, Dr. Yiyi Zhang, Qiqi Yang, Dr. Yaru Cheng, Prof. Dr. Haifeng Dong

文章的第一作者是北京科技大学化学与生物功能学院的博士生魏薇

Angewandte Chemie International Edition

DOI: 10.1002/anie.202116909